目的 对伯氏疏螺旋体（又称莱姆病螺旋体， Borrelia burgdorferi）外膜蛋白OspC和鞭毛蛋白FlaB原核表达后，制备多克隆抗体并进一步进行免疫原性检测。 方法 以伯氏疏螺旋体BgNMJW1基因组DNA为模板，PCR扩增出外膜蛋白OspC和鞭毛蛋白FlaB的基因片段，克隆入表达载体pGEX-6p-1，转入表达菌株Rosetta，经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导产生融合蛋白，并经谷胱甘肽转移酶柱蛋白纯化或割胶纯化。纯化后的蛋白用于免疫新西兰大白兔得到多克隆抗血清。 结果 经聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定，经过诱导的携带目的基因载体，与对照相比，有明显的目的蛋白表达，大小分别约为49×10 ³和63×10 ³，诱导结果表明，在细菌培养至吸光度（ A）值为0.4时，加入1 mmol/L的IPTG，在25℃下，诱导10 h，此时产生的蛋白表达量较大。将融合表达产生的蛋白纯化后免疫新西兰大白兔得到多克隆抗血清，应用抗血清对 B.garinii和 B.burgdorferi 2种基因型的伯氏疏螺旋体代表菌株（BgNMJW1和BbB31A3）的OspC和FlaB进行蛋白免疫印迹检测，可得到清晰检测条带。 结论 OspC和FlaB的联合应用可对莱姆病的诊断起到有效作用。

目的 对浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因进行比较。方法 收集浙江、福建省及上海市汉坦病毒部分M基因序列,应用Mega 4.0和DNAStar软件包进行系统发生分析,以邻位相连法(NJ)构建系统发生树,分析东南沿海地区浙江、福建省及上海市汉坦病毒的基因差异,分析采用1000个多序列组。结果 经对浙江、福建省及上海市若干株汉坦病毒基因的序列比较与系统进化分析,浙江省分离的同型别毒株的基因序列同源性高于福建省与上海市的分离毒株,而浙江省同地区分离株的核苷酸同源性更高,地区接近的分离株系统进化分支的分布也大部分更靠近。汉滩型病毒(HTNV)福建株的ZH53和汉城型病毒(SEOV)浙江建德株Gou3和ZJ5与本研究同型别的其他株及国际标准株的核苷酸同源性较低,分别为82.7%～86.3%和84.0%～85.3%,而且分别在HTNV和SEOV发生群中构成一独立分支。浙江省从田鼠中分离到SEOV,产生宿主“溢出”现象。结论 浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因差异和亲缘远近关系主要表现在地区性,显示出高度的地理聚集现象,浙江省建德地区和福建省分别存在SEOV和HTNV的特殊亚型病毒。

目的 分析浙江省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠形动物携带汉坦病毒状况及其型别。方法 应用直接免疫荧光试验和RT-PCR方法检测汉坦病毒抗原和核酸,阳性者用长爪沙鼠和Vero-E6细胞进行病毒分离,对分离株的M片段基因进行序列测定和分析。结果 2008－2011年在浙江省HFRS疫区捕获的鼠形动物中以黑线姬鼠为优势鼠种;从该鼠鼠肺中共分离到6株汉坦病毒,序列分析表明分离株均为汉滩型汉坦病毒,其中Z521、524、534为H7亚型,TT-27、T-43、R88可能为新亚型;6株分离株之间的基因同源性较高,并与以往浙江省分离株具有较高同源性。结论 2008－2011年浙江省HFRS疫区鼠间存在汉滩型汉坦病毒流行。

目的 初步评价应用自制辣根过氧化物酶（HRP）标记汉坦病毒（HV）重组N蛋白（rNP）的rNP?IgM直接捕捉ELISA 诊断试剂盒。方法 考核该试剂盒的特异性和稳定性；比较其与同类商品试剂盒的临床检测结果，以评估检测血清抗HV?IgM的敏感性。结果 （1）该试剂盒仅与抗HV?IgM 阳性血清发生反应，而与抗水痘病毒-IgM（抗VZV?IgM）、抗流行性乙型脑炎病毒-IgM（抗JEV?IgM）、抗登革热病毒-IgM（抗DV?IgM）、抗手足口EV71病毒-IgM（抗EV71?IgM）阳性血清均无反应；试剂盒放置37 ℃ 3 d，检测血清抗HV?IgM 的活性，无明显降低。（2）在120例临床疑似肾综合征出血热的144份血清中，2种试剂盒仅对12例的12份血清抗HV?IgM检测结果不一致，其中8例的首份血清，该试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（第2份血清2种试剂盒均阳性）；3例的首份血清（未采到第2份血清），该试剂盒为临界值，商品试剂盒阴性；另1例的首份血清该试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（2种试剂盒第2份血清和第3份血清均阳性）。 结论 实验室研制的捕获法ELISA抗HV?IgM诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性，适于HV感染的临床诊断和流行病学监测。

【摘要】 目的 了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒（HV）情况和病毒型别，为肾综合征出血热（HFRS）防治提供科学依据。方法 采集鼠类肺组织和血清标本，用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体，直接免疫荧光试验检测鼠肺HV抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero?E6细胞分离病毒，用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果 共捕获鼠形动物1129只，其中黑线姬鼠为优势种，鼠肺HV抗原阳性率为3.0%，鼠血标本IgG抗体阳性57份，阳性率8.0%。分离到6株汉滩（HTN）型病毒，其中来自黑线姬鼠5株，褐家鼠1株。结论 浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地，HV主要流行型别为HTN型。

【摘要】 目的 掌握浙江省肾综合征出血热（HFRS）流行特征，以制定有针对性的防治措施。方法 采用描述流行病学方法分析疫情， 实验室采用间接免疫荧光法检测HFRS患者血清中抗体， 直接免疫荧光法检测鼠肺汉坦病毒抗原。结果 2007年全省报告HFRS病例757例，主要分布在宁波、绍兴、台州、丽水、衢州等市，占全省发病总数的86.79%（657/757）。夏季和冬春季有2个发病高峰，青壮年农民病例居多。结论 浙江省HFRS疫情近年呈平稳趋势，但一些县（市）发病率居高不下，应加强重点地区防制工作。

目的 了解浙江省肾综合征出血热(HFRS)流行特点及汉坦病毒(HV)型别,为防治提供科学依据。方法 鼠肺HV抗原检测采用直接免疫荧光法(DFA),病毒分离采用阳性鼠肺研磨液接种幼龄长爪沙鼠,再经Vero-E6细胞传代,用单克隆抗体DFA鉴定毒株及分型。结果 从捕自浙江省龙泉地区的8份阳性鼠肺中分离到3株HV,经DFA鉴定均为汉滩型(Ⅰ型)病毒,3株病毒在Vero-E6细胞中的感染滴度为10 ^4.75～10M ^5.25CCID ₅₀/ml。结论 从鼠类肺组织中分离到3株汉滩型HV,毒株均能在Vero-E6细胞中较好增殖,有可能成为HFRS疫苗后备毒株。

目的 构建汉坦病毒(HV)Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体,探索其在昆虫细胞中的表达及在免疫荧光诊断中的应用。方法 以质粒pUCm-Z10M为模板设计引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增Z10株G2基因片段,将G2片段克隆入pUCm-T质粒载体,碱法提取质粒pUCm-Z10-G2,酶切后将回收片段插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa,构建重组体pFastBacHTa-Z10-G2,重组体转化感受态细胞 E.coliDH10Bac后,经2轮筛选,提取重组质粒转染昆虫细胞sf9,并用间接免疫荧光技术检测表达的G2蛋白。结果 获得含有编码HVZ10株的包膜糖蛋白G2基因的重组质粒,转染昆虫细胞表达出G2蛋白,与肾综合征出血热(HFRS)阳性血清反应,昆虫细胞内呈现特异性环状荧光。检测40份HFRS血清,与全病毒细胞抗原片的符合率为95%。结论 成功构建HVZ10株包膜糖蛋白G2基因的表达载体,并在昆虫细胞中表达。可利用重组G2蛋白检测HV感染。

目的 研究肾综合征出血热(HFRS)VerO传代细胞疫苗。方法将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z ₁₀(Ⅰ型)、Z ₃₇(Ⅱ型)适应到VerO细胞上进行连续传代,并用不同代次的VerO细胞适应株制备VerO传代细胞疫苗。结果Z ₁₀、Z ₃₇株感染VerO细胞后第1代即可达到较高病毒滴度,并且在VerO细胞中持续传代适应,病毒滴度分别维持在6.25～6.75和6.50～7.00lOgTCID ₅₀/ml之间,较为稳定。用不同代次的VerO细胞适应株制备而成的HFRSVerO细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高,反向间接血凝效价从Z ₁₀Cp ₁VerO细胞疫苗的阴性上升到Z ₁₀Cp ₁₀VerO细胞疫苗的1∶64,从Z ₃₇Cp ₁VerO细胞疫苗的1∶2上升到Z ₃₇Cp ₁₀VerO细胞疫苗的1∶64;疫苗病毒滴度(lOgTCID ₅₀/ml)从Z ₁₀Cp1VerO细胞疫苗的4.25上升到Z ₁₀Cp ₁₀VerO细胞疫苗的6.50,从Z ₃₇Cp ₁VerO细胞疫苗的6.25上升到Z ₃₇Cp ₁₀VerO细胞疫苗的7.50。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论HFRSVerO传代细胞疫苗的生产,疫苗株在VerO细胞中的连续传代适应起关键性作用。

目的通过对分离到的汉坦病毒(HV)免疫原性及病毒滴度的选育,选择出疫苗毒株及筛选出不破坏病毒血凝抗原的灭活剂和疫苗基质细胞,提高疫苗的规模化生产技术,生产出副反应轻,免疫原性和现场防病效果好的各种剂型的疫苗,满足人群免疫预防的需要。方法分离到的HV株,应用多种方法进行免疫原性和动物保护试验选育;疫苗灭活剂筛选通过与甲醛灭活效果比较,观察对血凝素抗原的影响,以此作为判断指标;疫苗基质细胞建立主要通过观察病毒在各种细胞上的增殖滴度、基质细胞的贴壁时间及收液次数等方法,选择基质细胞。结果从45株病毒株中成功选育出Z10(汉滩型)和Z37(汉城型)疫苗病毒株,两株疫苗免疫原性好、病毒滴度高;成功选择出β-丙内酯作为疫苗灭活剂,它不破坏病毒的血凝素抗原,接种反应轻;建立的长爪沙鼠肾原代细胞作为疫苗基质,不仅病毒滴度高,而且贴壁效果好,可以做到多次收液的目的。结论我们研制的疫苗无论是单价的Ⅰ型、Ⅱ型疫苗,还是双价(Ⅰ型和Ⅱ型混合)疫苗,接种人体后副反应轻,免疫效果好,现场防病效果也很理想,是目前控制肾综合征出血热流行最有效和经济的手段和措施,值得大力推广。

目的从肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺中分离汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行型别鉴定和生物学特性研究,为HFRS疫苗后备毒种库的建立打下基础。方法疫区阳性鼠肺研磨液接种长爪沙鼠分离病毒,并将分离到的HV经乳沙鼠脑内连续传代,采用直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验,检查毒株的型别,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度和抗原滴度。结果从疫区32份阳性鼠肺中分离到9株HV,经单克隆直接荧光血清检查6株为汉滩病毒株,3株为汉城病毒株,经乳沙鼠脑内连续传代,其中4株毒株的病毒滴度和抗原滴度较高,汉滩和汉城毒株的病毒和抗原滴度最高分别达10 ^6.50、10 ^6.00和1∶5120、1∶5120。结论4株毒株的病毒滴度和抗原滴度均较高,可作为HFRS疫苗后备毒种的筛选毒株。

目的:通过对肾综合征出血热(HFRS)监测分析,掌握全省HFRS的流行规律,控制其暴发流行,进一步降低该病的发病率,为制定防制措施提供依据。方法:采用直接免疫荧光(FAT)法,检测鼠肺HV抗原;采用间接免疫荧光(IFAT)法检测HFRS病人、健康人血清及鼠血中HV抗体。结果:1997～2000年全省共发病9041例,年均发病率为5.08/10万,死亡48人,病死率为0.53%。病例仍主要分布在沿钱塘江两岸的浙东和浙西丘陵区,浙南山区次之,浙北平原区和海岛区病例较少,全省11个地市均有发病,以浙东和浙西丘陵区的绍兴、宁波、台州、衢州、杭州和金华6市发病最多。宿主动物野外以黑线姬鼠为优势种,占80.79%,室内以褐家鼠为优势种,占80.91%。结论:需要进一步加大监测力度,同时接种HFRS疫苗。

目的：通过监测分析，掌握全省肾综合征出血热(HFRS)流行规律，控制暴发流行，进一步降低发病率，制订防制措施。方法：采用直接免疫荧光法(FAT)检测鼠肺HV抗原；采用间接免疫荧光法(IFAT)检测HFRS病人、健康人血清以及鼠血中HV抗体。结果：1997～1999年全省共发病7 534例，年均发病率为5.65/10万，死亡39人，病死率为0.52%。病例仍主要分布在沿钱塘江两岸的浙东和浙西丘陵区，浙南山区次之，浙北平原区和海岛区病例较少；全省11个地市(除舟山以外)均有发病，以浙东和浙西丘陵区的绍兴、宁波、台州、衢州、杭州和金华6市发病最多，占全省病例总数的87.44%。宿主动物野外以黑线姬鼠为优势种，占80.24%；室内以褐家鼠为优势种，占85.00%。结论：进一步加大监测力度及接种HFRS疫苗，是控制该病的有效措施。